EPI400 Chemically Competent Cell

基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL(StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

簡要說明：

EPI400菌株來源于 EC100菌株，將 EC100 核基因中控制質?？截悢档?pcnB基因刪除后引入一個誘導啟動子驅動的 pcnB基因，即是EPI400 菌株。 EPI400 菌株可以降低質粒的拷貝數，特別適合于各種不穩定DNA 或毒性基因的克隆，在加入誘導劑Copy Cutter InductionSolution后又可以提高質粒產量到正常狀態。 [mcrA, Δ(mrrhsdRMS-mcrBC)]基因型使 EPI400 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA。 recA1 和endA1 的突變有利于插入DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提取。lacZΔM15 標記的存在使EPI400可用于藍白斑篩選，tonA 賦予其抗噬菌體T1和 T5的能力，rpsL賦予其LIAN霉素抗性。EPI400感受態細胞經特殊工藝制作，pUC19質粒檢測轉化效率>108 cfu/μg DNA。

操作說明：

1. EPI400感受態細胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態時迅速插入冰中），加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手bo打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。 

2.42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。 

3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。 

4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。 

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。

注意事項：

1.感受態細胞最好在冰上融化。 

2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。 

3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。