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產品分類
Cassification
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詳細介紹
| 品牌 | Abnbio | 貨號 | ABG208-50 |
|---|---|---|---|
| 規格 | 50X100ul | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 感受態細胞 | 應用領域 | 環保,食品/農產品,化工,生物產業,制藥/生物制藥 |
基因型
F-ompT hsdSB(rB-mB-) galdcm met(DE3)
簡要說明
B834 是 BL21 菌株的父系菌株。該系列宿主菌是蛋氨酸缺陷型，可以用來高水平，高特異性的使用35S-蛋氨酸和硒代蛋氨酸標記目的蛋白，進行蛋白質晶體結構研究。B834宿主菌也是 lon 和 ompT 蛋白酶缺陷型菌株。DE3 是溶源性的λDE3, 所以帶有T7RNA 聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于 pET 系列載體，及其他T7 啟動子系列載體。
操作說明
1、取 100μl 冰上融化的B834（DE3）感受態細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25 分鐘。
2. 42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入 700μl 不含抗生素的無菌培養基（2YT或LB），混勻后 37℃，200rpm 復蘇60 分鐘。
4. 5000rpm 離心一分鐘收菌，留取100μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT 或LB培養基上。
5. 將平板倒置放于 37℃培養箱過夜培養。
注意事項
1、感受態細胞最好在冰上融化。
2. 混入質粒時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。
4. 誘導時，IPTG 濃度可選（0.1-40mM 均可）。
5. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優化。
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